pemeriksaan index MPN Escherichia coli

Foto: Briliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB)

Media :

1.Lactose Broth Single Strength (LBSS), Tiap tabung 10 ml

2.Lactose Broth Triple Strength (LBTS), Tiap tabung 5 ml

3.Briliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB), Tiap tabung 10 ml

4. Media Mac Conkey/TBX/Endo Agar/Eosin Methilen Blue Agar/Tergitol 7 agar plate

5.Media Gula-gula (Gulukosa, laktosa, manitol, maltose, sakarosa)

6. Sulfur Indole Motility(SIM)

7. Triple Sulfur Iron Agar (TSIA)

8. Simmon’s Citrat (media no 4 s/d 8 digunkan untuk identifikasi E.coli)

Ragam pemeriksaan MPN yaitu :

a. Ragam I : 5x10 ml, 1x1ml, 1x0,1

Ketentuanya, Spesimen cair atau yang dilarutkan ditanam dalam :

-5 tabung LBTS diisi sampel masing masing 10 ml

-1 tabung LBSS diisi sampel masing masing 1 ml

-1 tabung LBSS diisi sampel masing masing 0,1 ml

Tujuan : Pemeriksaan MPN specimen yang telah diolah atau angka kuman diperkirakan rendah

b. Ragam II : 5x10 ml, 5x1ml, 5x0,1ml

Ketentuanya,Spesimen cair atau yang dilarutkan ditanam dalam :

-5 tabung LBTS, masing-masing 10 ml

-5 tabung LBSS, masing-masing 1 ml

-5 tabung LBSS, masing-masing 0,1 ml

Tujuan: Pemeriksaan MPN specimen yang belum diolah atau angka kuman diperkirakan tinggi

c. Ragam III : 3x10 ml, 3x1ml, 3x0,1ml

Ketentuanya, spesimen cair atau yang dilarutkan ditanam dalam :

-3 tabung LBTS, masing-masing 10 ml

-3 tabung LBSS, masing-masing 1 ml

-3 tabung LBSS, masing-masing 0,1 ml

Tujuan : Alternatif ragam II jika tabung dan jumlah media terbatas

Cara Kerja

Ragam I

1. Spesimen yang sudah ditanam dalam tabung LBTS dan LBSS, sesuai ketentuan diinkubasi 37 ⁰C selama 48 jam

2. Tiap tabung yang menunjukkan gas positif, ditanam kedalam Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB), diinkubasi 37 ⁰C selama 48 jam

3. Dibaca dan dicatat BGLBB yang menunjukan positif gas, sebelum di cari nilai Index MPN harus dipastikan apakah bakterinya E. coli atau bukan

Caranya :

1) Larutan dari tabung BGLBB yang positif gas ditanam dimedia Mac Conkey/TBX/Endo Agar/Eosin Methilen Blue Agar/Tergitol 7 agar plate, inkubasi 37 ⁰C 24 jam

2 ) Koloni yang tersangka E.coli ditanam dimedia gula-gula, SIM, TSIA, SC, (bisa ditambah dengan penanaman di Nutrien Agar untuk subkultur), inkubasi 37 ⁰c 24 jam

3) Dibaca pertumbuhan dimedia

Hasil Identifikasi Escherichia coli

1. Pertumbuhan di media Mac Conkey

Foto : Koloni bakteri Escherichia coli di media Mac Conkey (MC)

Ciri-ciri koloni Escherichia coli dimedia MC :Koloni sedang, Merah bata-merah tua, cembung, smooth, berkabut.

2. hasil Uji Biokimia

Foto : Hasil Uji Identifikasi (biokimia) Escherichia coli

Ket (kiri ke kanan):

Na : Tumbuh

Gula-gula: + (+g), +, +, +, + (Kanan → kiri : Glukosa, laktosa, manitol, maltosa, sakarosa)

SIM : H2S (-), Indol (+), Motilitas (+)

TSIA: Lereng/Dasar (K/K), Gas (+), H2S (-)

SC : (-)

4. BGLBB yang menunjukkan gas positif (point no 3) dan telah di pastikan positif E.coli, Di cari nilai Index MPN-nya pada table PMN atau menggunakan Rumus .

Rumus Index MPN per 100 ml

(A+B+C) X (√S x N)-1 X 100 = …….

Keterangan

A = Jumlah tabung (+) gas penanaman kelompok pertama

B= Jumlah tabung (+) gas penanaman kelompok kedua

C= Jumlah tabung (+) gas penanaman kelompok ketiga

S= Jumlah ml sampel yang ditanam

N= Jumlah ml sampel yang negatif

Perhitungan index MPN bisa juga dilakukan dengan Formula Thomas...

Catatan :

-Untuk MPN E.coli cara kerja Ragam II dan Ragam III sama seperti ragam I (perbedaan hanya pada ketentuan ragam)

-Apa bila semua tabung BGLBB menunjukkan hasil (+) gas, perlu dilakukan penanaman ulang dengan specimen yang diencerkan 10X atau 100X lebih rendah dari yang sebelumnya. Hasil MPN dikali dengan besar pengenceran

-Pemeriksaan MPN coliform dan coliform tinja hampir sama dengan pemeriksaan MPN E. coli, Tapi pada pemeriksaan MPN coliform dan coliform tinja tidak perlu dilakukan identifiksi/pemastian jenis bakteri. Pemeriksaan MPN coliform (BGLBB diinkubasi pada suhu 37 derjat C selama 48 jam), dan untuk pemeriksaan MPN coliform tinja (BGLBB diinkubasi pada suhu 44-44,5 C selama 24 jam).